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修饰磷酸应用举例:SELEX适配体文库筛选

2021-04-28
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作为全球领先的核酸修饰专家,TriLink 的修饰性核苷酸在用于药物研发的各种技术中也应用广泛,SELEX技术便是其中之一。


SELEX,即指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential EnrichmentSELEX),是一项用于筛选核酸适配体(Aptamer)的技术。核酸适配体,是可与蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞等目的靶标进行高亲和力和特异性结合的一段寡核苷酸序列(DNARNA)。


与抗体相比,极性带负电的核酸分子与蛋白结合时可以提供更多的氧原子,提供更多的电子对去产生更多的氢键,增加相互作用的键能,维持更稳定的结构;另外,核酸适配体与抗体相比具有分子量小,稳定性更好,易改造修饰,无免疫原性,制作周期短,可以通过人工合成等优势,免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。因此,核酸适配体相比抗体,在生化分析,生物医疗,新药研发等方面都有更大的潜力。


SELEX流程:

1. 确定目的靶标。(目标分子可以是蛋白质,小分子或超分子结构,甚至细胞。)

2. 构建随机寡核苷酸(~1 x 10 15个寡核苷酸)文库。

3. 靶标与文库核酸共孵育

4. 去除未结合的核酸片段,而结合的那些片段进行扩增后,进行下一轮筛选

5. 通过该过程,将与靶标有高亲和力的寡核苷酸从数万亿的数量中筛选出来

6. 对最终筛选出的适配体进行分类,纯化、测序以及后期修饰。


适配体的后期修饰,可以使适配体更加稳定性,并巩固适配体与目的靶标的亲和力,且进行了荧光等功能团修饰的适配体还可以用于检测和固定目的靶标。Trilink2'-Fluoro-dCTP(目录号N-1008)和2'-Fluoro-dUTP(目录号N-1010就经常被用于适的修饰。这些修饰类型提高了适体的稳定性,使其对核酸内切酶降解的抵抗力增强。


由SELEX衍生的PhotoSELEX技术使用5--2'-脱氧尿苷-5'-三磷酸酯(Br-dU)(TriLink目录号N-2008)代替标准的胸苷。除了通过空间构象与目的靶标结合,修饰体的Br-dU残基和靶标的酪氨酸之间也存在共价键。Br-dU修饰的寡核苷酸暴露于辐射中,处于正确构象的寡核苷酸靶分子上的特定位点共价交联。该技术可以实现蛋白质的高通量检测


SELEX只是修饰核苷酸的众多应用之一。TriLink提供了可用于多种研究目的的修饰核苷酸。




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