ELISA实验常见问题及解答 - 18bet开户ELISA - 18bet开户
bet188体育平台,欢迎光临18bet开户生物科技商城!
服务热线:400 680 0892
18bet官网中文 News

ELISA实验常见问题及解答

2021-06-23
浏览次数: 9


阳性对照偏低或低吸光度
原因解决方案
试剂未平衡至室温● 实验开始前,将试剂盒从冰箱取出平衡至室温
检测体积偏小● 确保取液时,正确使用移液器
● 
检查移液器吸液管道是否阻塞
● 
校正移液器
孵育时间过短● 使用计时器,准确孵育时间
底物受污染● 使用新配制的试剂,重新实验
包装袋中有湿气● 检查袋中是否有干燥剂
● 
封好未使用的孔条
● 
首次开袋时,应标上日期
样本中有抑制剂● 叠氮钠会抑制 HRP 酶的活性
洗涤步骤过于剧烈● 降低洗涤系统的压力
试剂在使用前未混匀● 使用前务必混匀试剂
实验开始前微孔变干燥● 实验过程勿中断,需连续完成所有实验步骤
未加终止液● 加入终止液,增强颜色反应的强度,稳定最终的颜色反应
结合物工作液浓度偏低● 准确稀释制备工作液,按说明书建议操作
读数时使用的滤光片不正确● 使用 TMB 底物时,450nm 波长下读数,650nm 波长下读取校正读数
标准曲线良好但样本无检测信号
原因解决方案
样本中无待检物● 设置对照,重新实验
样本中其他物质影响或掩盖检测● 作适当稀释,降低其他物质干扰或作系列稀释 , 检测回收率
样本中检测物过高 , Hook 效应导致假阴性● 适当倍数稀释样本,检测物浓度尽量在检测试剂盒检测范围内
假阳性反应
原因解决方案
洗涤不充分● 使用前须检查洗板机是否正常工作
洗板机管道阻塞● 须经常维护洗板机
微孔板受酶结合物污染
加结合物时 , 洒在微孔边缘
结合物污染了底物溶液
● 小心向微孔加入结合物,加入微孔底部中央,避免与孔壁和边缘接触
检测样本中含有红细胞● 离心
微孔中液体挥发● 用封板胶密封反应孔 , 置于湿盒内
结合物工作液浓度过高● 按说明书稀释
孵育温度过高● 降低温度
重复性较差
原因解决方案
微孔中有小气泡● 用针尖挠破气泡
分液误差● 检查分液装置
试剂未混匀● 确保充分混匀试剂
洗涤不充分● 确保所有微孔都抽吸干净,并及时填满微孔
微孔被吸头划破● 洗液或注液时,小心操作
样本中有杂质或沉淀物● 使用前须离心
孵育温度不稳定● 在温度稳定的孵育箱中进行孵育
使用了用过的封板胶纸● 每次须使用新的封板胶纸封闭反应孔
高背景或阴性对照值偏高
原因解决方案
阴性对照孔被阳性对照或样本污染● 洗涤时,勿将洗液溢出板孔外
● 
确保洗涤时每个孔都充满缓冲液,洗涤后确保将残余液体从孔中移除
● 
在微孔中央吸取样本或试剂时,避免枪头与内壁或边缘接触
● 
重新洗涤
抗体非特异性结合● 封闭液不适合,更换封闭液
● 
预处理微孔以防止抗体非特异性结合
酶结合物浓度过高● 检查浓缩酶结合物是否按照说明书要求正确稀释
孵育温度过高● 抗体在适当温度下具有最适结合活性,确保孵育在说明书指定温度下进行
缓冲液被污染● 准备新的缓冲液,进行灭菌过滤
孵育时间过长● 按说明书规定时间孵育,或缩短孵育的时间
底物在使用前曝光● 应避光保存于暗处
读板前停留时间过长● 加终止液后 3 分钟内读数
读数时使用的滤光片不正确● 检查滤光片, TMB 底物推荐在 450nm 下读数
未加入终止液● 如底物反应未终止,颜色会继续生成
标准曲线不佳
原因解决方案
倍比系列稀释标准品时,未混匀● 加入标准品和稀释液后,须混匀
过早稀释● 在刚要使用时,准备试剂立即加入微孔
洗涤不充分● 确保所有微孔都抽吸干净,并及时填满微孔
读数时间超出了显色所需时间● 读数时间在说明书推荐的时间内,注意观察颜色变化
体积不正确● 校正移液器
移液器使用不当● 快速等量地将吸液管中的液体分配到各微孔中,使用校正过的移液器
整块板产生阳性 OD 值或整个板显蓝色
原因解决方案
洗涤液体积不足或底物被残留于孔低的结合物所污染● 洗涤时,缓冲液充满至孔边缘,但要确保不能溢出孔外
结合物浓度过高● 检查是否按照说明书推荐比例稀释
血清中有血清因子● 勿加热血清
底物容器不洁净● 用酸清洗容器瓶,用蒸馏水冲洗
底物孵育时,微孔板曝光● 加底物时,立即将板置于暗处
整块板 OD 值偏低
原因解决方案
显色时间不足● 适当延长显色时间
孵育温度偏低● 36 度为最适反应温度 ( 18bet开户 ELISA 试剂盒 )
未加终止液● 加入终止液,增强颜色反应的强度,稳定最终的颜色反应
部分原因也可参考【阳性对照偏低或低吸光度】
显色缓慢
原因解决方案
样本未置于室温● 实验开始前,将样本平衡至室温
酶结合物活性减弱● 检测稀释度
酶活性受到抑制如叠氮钠● 避免使用不当的防腐剂
显色温度不适当● 按说明书操作
边缘效应
原因解决方案
蒸发● 各操作步骤间,须使用封板胶密封反应板
温度不均匀● 在孵育时,将板放于 36 ℃孵育箱中,避免温度波动。勿叠放反应板防止受热不均




18bet开户生物科技有限公司

全国服务热线: 4006-800-892 邮箱: 5014697328@qq.comom

大同:0371-28730419 上海:0371-28730419 北京:0371-28730419

太原:0371-28730419 香港: 852-69410778

代理品牌网站: www.equanxin.com
自主品牌网站: www.neobioscience.net

分享到:
上一篇:无下一篇:无
关注18bet开户公众号
Copyright ©2021 - 2023 18bet开户
犀牛云提供企业云服务
Baidu
sogou