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ChIP-IT® PBMC外周血单核细胞ChIP试剂盒

2021-05-18
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外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)包括淋巴细胞(T细胞,B细胞和NK细胞),单核细胞和树突状细胞,它们是外周免疫系统的重要成员,常常用于免疫学、肿瘤和传染病的研究。
然而由于PBMCs能够抵抗常规细胞裂解的作用,因此很难从PBMCs细胞中提取高质量的染色质用于ChIP实验。Active motif公司基于多年的经验,开发出ChIP-IT® PBMC试剂盒,试剂盒提供专用的试剂和操作步骤,可从PBMCs细胞中提取高质量的染色质,同时试剂盒包含备受欢迎的ChIP-IT® High Sensitivity Kit里完整的试剂和操作手册,用于ChIP和DNA的纯化。


ChIP-IT® PBMC 试剂盒的特点
● 可从PBMCs细胞中包括T&B淋巴细胞、树突状细胞和单核细胞中提取高质量的染色质;
● 可从ng级的染色质中高灵敏富集DNA;
● 来源于ChIP-IT High Sensitivity Kit 里优化的试剂,可提高信号,降低背景。
● 和磁珠捕获的方法相比,重力过滤洗涤的方法更快更简单,并且可以更好的保持结果的一致性;
● 严格验证的操作步骤,富集的DNA可用于qPCR和ChIP-Seq 分析;


ChIP-IT® PBMC试剂盒的工作原理

 ChIP-IT® PBMC外周血单核细胞ChIP试剂盒


 

图1. ChIP-IT PBMC试剂盒的操作流程
用福尔马林固定细胞,交联并保护蛋白/DNA的相互作用。超声断裂DNA成小片段,加入感兴趣的DNA结合蛋白抗体,抗体-蛋白/DNA复合物被Protein G 琼脂糖珠沉淀下来,重力过滤洗涤。将蛋白/DNA解交联,蛋白酶K消化去除蛋白质,回收DNA并纯化。富集的DNA可用于位点特异性分析或全基因组分析。


ChIP-IT® PBMC外周血单核细胞ChIP试剂盒
 

图2. CD8T细胞H3K9ac的ChIP结果
从2×107个CD8+T细胞中制备染色质,取10ug染色质用H3K9ac抗体进行ChIP。富集的DNA用ChIP-IT qPCR Analysis Kit (货号53029)进行标准化qPCR分析。阴性对照引物(货号71001)显示无特异性富集,而ACTB2(货号71005)和GAPDH-2(货号71006)阳性对照引物都显示对2群T细胞H3K9ac 的特异性富集。数据表示每1000个检测细胞中所检测到富集结合情况,代表三次重复实验所得原始数据的均值. 数值都除以1000,转化为对ChIP input的百分比回收率。


ChIP-IT® PBMC外周血单核细胞ChIP试剂盒
 

图3. 使用ChIP-IT High Sensitivity Kit 的操作步骤,可提高ChIP-IT PBMC试剂盒的灵敏度,增强可重复性
从2×107个PBMCs细胞中制备染色质,取10ug染色质用H3K4me3抗体进行ChIP。富集的DNA用ChIP-IT qPCR Analysis Kit (货号53029)进行标准化qPCR分析。阴性对照引物(货号71002)显示无特异性富集,而阳性对照引物显示对3组PBMCs样本H3K4me3 的特异性富集。数据表示每1000个检测细胞中所检测到富集结合情况,代表三次重复实验所得原始数据的均值. 数值都除以1000,转化为对ChIP input的百分比回收率。


产品信息
 产品名称
 规格
 产品编号
 16 rxns
 53042
 10 rxns
 53029


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